研究会（研究発表会）
第59回（新潟）
講演要旨
RT-PCR法によるトマト感染葉からのTMVと ToMVの同時検出の検討
渡辺貴弘1・福田明美2・加藤久晴3・古河 衞1（1福井農試・2福井農林・3福井県立大）
RT-PCR法により，タバコモザイクウイルス（TMV）とトマトモザイクウイルス（ToMV）の同時検出について検討した。TMVについては，ウイルスゲノムの5547番目および6217番目が3’末端になるように上流および下流プライマーを設計した。ToMVについては，強毒株を検出するプライマーについて検討した。すなわち，ToMVの弱毒株L11Aと塩基が異なる5816，5277番目が3’末端になるように上流および下流プライマーを設計し，その際3’末端から3番目の塩基がミスマッチになるようにした。感染葉よりRNAを抽出した後，設計したそれぞれのプライマーを混合し，RT-PCR反応を実施した。逆転写反応は60°C/15分，94°C/2分，PCR反応は94°C/15秒，56°C/30秒，68°C/45秒の30サイクルとした。その結果，TMV単独感染葉，ToMV単独感染葉からは想定される709bp，578bp のバンドがそれぞれ増幅された。また，TMV・ToMV混合感染葉からも両バンドが増幅されたが，ToMVのバンドは少し薄くなる傾向が確認された。一方，L11A単独感染葉およびTMV・L11A混合感染葉では，L11Aは増幅されなかったことから，設計したプライマーはToMV強毒株を特異的に検出できることが示唆された。